Izolace lidských jaterních membránově vázaných karbonylredukujících enzymů pomocí originálního afinitního nosiče a jejich následná identifikace a charakterizace
Zhruba 30 % všech lidských proteinů je považováno za integrální membránové proteiny. Ačkoliv se v organismu podílejí na mnoha fyziologických funkcích, je o nich známo stále jen poměrně málo informací, jelikož studium takových proteinů je velmi náročné. Jedna z významných rolí membránových proteinů endoplasmatického retikula je jejich účast v metabolismu řady léčiv i endogenních látek. Jsou zde lokalizovány také karbonylredukující enzymy, které jsou charakterizovány především ve vztahu k metabolismu endogenních substrátů. Znalosti o jejich podílu na metabolismu léčiv zatím nejsou příliš velké. Výzkumem biotransformace léčiva oracinu, především jeho stereospecifické přeměny, byla zjištěna přítomnost karbonylredukujících enzymů v endoplasmatickém retikulu, které se podílí na jeho metabolismu. Jeden z karbonylredukujících enzymů byl již v minulosti částečně purifikován na našem pracovišti pomocí klasických chromatografických metod, nicméně identifikace nebyla dokončena z důvodu nedostatečného množství a čistoty pro MS analýzu. Proto byl vytvořen a úspěšně otestován nový, originální magnetický afinitní nosič s ligandem oracinem, který bude zařazen do purifikačního schématu. Díky vysoké specifitě takového nosiče bude možné tyto protein/y izolovat a následně identifikovat a připravit v rekombinantní formě pro základní charakterizaci. Vzhledem k nízkým znalostem v oblasti mikrosomálních karbonylredukujících enzymů podílejících se na metabolismu xenobiotik se dá očekávat, že získané výsledky budou zcela nové a unikátní.
Číslo:
GAUK926213
Období:
01.01.2013 - 31.12.2015
Poskytovatel:
Univerzita Karlova - Grantová agentura UK
Hlavní řešitel:
Andrýs Rudolf PharmDr., Ph.D. - Farmaceutická fakulta v Hradci Králové
Celkový objem financí:
811 000,00 Kč
Interní řešitelé
Hlavní řešitel: PharmDr. Rudolf Andrýs, Ph.D.
- Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, FaF HK
Spoluřešitel: Mgr. Andrea Křížová
- Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, FaF HK
Spoluřešitel: Mgr. Veronika Nešverová
- Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, FaF HK
Spoluřešitel: doc. RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D.
- Katedra biochemických věd, FaF HK
Spoluřešitel: Mgr. Dominika Šubová
- Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, FaF HK
Spoluřešitel: Mgr. Radka Štýbnarová
- Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, FaF HK
Spoluřešitel: PharmDr. Juraj Lenčo, Ph.D.
- Katedra biochemických věd, FaF HK
Spoluřešitel: Jana Havránková, DiS.
- Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, FaF HK
Spoluřešitel: PharmDr. Tereza Zahradníková
- Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, FaF HK
Školitel: prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D.
- Katedra biochemických věd, FaF HK